Incidencia de Trichomonas tenax en pacientes con periodontitis marginal crónica (página 2)

Son numerosos los investigadores que han podido aislar a
este microorganismo
a partir de muestras de cálculo
dental y placa dental subgingival en grupos de
pacientes con problemas
periodontales, tal y como se especifica a continuación
(TABLA 1):

La incidencia de T. tenax en pacientes con
Gingivitis Ulcerativa Aguda ha sido puesta de manifiesto en
varios reportes publicados al respecto. Destacan esos reportes
que dicha incidencia oscila entre un 12% y un 32%, en
relación con el número total de pacientes
estudiados con la enfermedad antes
señalada.32,33

Se ha podido demostrar la existencia de dificultades
para poder
diagnosticar la presencia de T. tenax en aquellos
pacientes que presentan micosis en la cavidad bucal, según
lo refiere un estudio realizado a 1.018 pacientes con la
condición antes señalada, de los cuales se pudo
aislar el protozoario a 148 (14,5%) de los mismos.
Tambíén se señala en el mismo estudio que
las dificultades para la identificación de T. tenax
estaban estrechamente relacionadas con la infección por
hongos.34

En otro estudio realizado por Kurnatowska y
Kurnatowski,35 se tomaron muestras de saliva a
936 pacientes, encontrándose T. tenax en 90 de
éstos, de los cuales en 85 casos fueron identificados a su
vez hongos, estableciéndose por lo tanto que la
trichomoniasis en cavidad bucal estaba complicada con micosis.
Este diagnóstico fue más frecuente en
pacientes con Leucoplasia y con Liquen Wilsoni. También se
pudo establecer en esta investigación, una asociación
estadísticamente significativa de T. tenax con
hongos y pacientes con xerostomía, sensación de
quemadura, sacos periodontales y raices expuestas. El protozoario
no se encontró en ningún paciente con Caries Dental
ni con Estomatitis Aftosa Recurrente.

Tomando en consideración todo lo anteriormente
expuesto, el propósito de este estudio fue determinar la
incidencia de T. tenax en un grupo de
pacientes con P.M.C., quienes asistían a la Facultad de
Odontología de la Universidad
Central de Venezuela, a
fin de recibir tratamiento odontológico.

Materiales y métodos

Selección de los pacientes:

En este estudio, se seleccionaron 60 pacientes que
asistían a la Facultad de Odontología de la U.C.V.
por diversos motivos. Estos pacientes fueron divididos en dos
grupos:

1) Grupo Experimental: Conformado por 30 pacientes
adultos que tenían P.M.C. (diagnóstico
previamente establecido en sus historias clínicas),
quienes aún no habían recibido tratamiento
periodontal, de los cuales 17 eran del sexo
masculino y 13 del sexo femenino y cuyas edades oscilaban entre
20 y 55 años. A cada uno de estos pacientes se les
realizó observación clínica de sus
cavidades bucales, denotándose gran cantidad de
cálculo dental y de detritus, lo que indicaba desde
luego una higiene bucal
deficiente. Para confirmar que tenían P.M.C., se les
tomaron a cada uno de los pacientes radiografías de la
zona elegida, previo a la toma de las muestras, para así
evidenciar la pérdida ósea característica
de esta enfermedad.

2) Grupo Control: El
cual estaba conformado por 30 pacientes adultos, a quienes ya
se les habían realizado los procedimientos
de tartrectomía y de técnicas
de enseñanza de higiene bucal, siendo
satisfactorias las condiciones periodontales, así como
la higiene bucal de los mismos. Dichos pacientes no
tenían historia de P.M.C. y se
encontraban en la fase resolutiva del tratamiento
odontológico (instalación de prótesis
parcial fija, instalación de prótesis parcial
removible en los casos requeridos o culminación de la
Odontología Operatoria en los que no requerían
tratamiento protésico). La edad de estos pacientes
oscilaba entre 22 y 63 años y en cuanto al sexo, 15 eran
masculinos y 15 eran femeninos.

Toma y Recolección de las
muestras:

Para realizar la toma de la muestra de los
pacientes de ambos grupos, se seleccionó la zona
anteroinferior de cada uno de estos tanto por vestibular como por
lingual, debido a que en esa zona existía gran cantidad de
cálculo dental acumulado, así como de detritus y de
placa dental subgingival (en los pacientes con P.M.C.). Del grupo
de pacientes periodontalmente sanos se tomaron muestras de placa
dental subgingival, ya que no tenían ni detritus ni
cálculo dental en sus dientes.

Para la remoción del cálculo dental,
así como de los detritus y de la placa subgingival se
utilizaron tartrectomos y curetas periodontales previamente
esterilizadas, tomando el material con estas últimas del
fondo de los sacos periodontales de los pacientes con P.M.C.
Asimismo, se tomaron muestras de placa dental alrededor del
cuello de los dientes de los pacientes del grupo control,
empleando para ello curetas previamente esterilizadas. El
cálculo dental removido de los pacientes del grupo
experimental, fue triturado previo a la siembra y a la
observación microscópica, utilizando para ello
varillas de vidrio
previamente esterilizadas.

Transporte de las muestras:

Las muestras tomadas fueron colocadas en los viales
conteniendo el medio de transporte
(Solución de Ringer estéril) y llevadas al laboratorio
para su posterior siembra y observación
microscópica.

Siembra de las muestras:

Una vez que fueron llevadas las muestras al laboratorio,
se tomaron 0,1 ml. de la solución de Ringer que
contenía este inóculo, utilizando para ello pipetas
estériles de 1 ml, inoculándose la cantidad antes
señalada en el caldo selectivo de Kupferberg, empleado
para el crecimiento de T. tenax ("Kupferberg
Trichomonas Broth". Difco Laboratories, Detroit, Michigan,
U.S.A.), al cual se le añadieron 0,1 g de Cloranfenicol
para evitar el crecimiento de bacterias y
otros microorganismos. Se realizaron dos siembras por cada
paciente, una en aerobiosis y la otra en anaerobiosis, utilizando
la jarra destinada para tal fin (Gas Pak). Los
medios de
cultivo sembrados fueron llevados a la estufa a 37°C por 72
horas.

Observación
Microscópica:

Para la identificación de T. tenax se
realizaron observaciones microscópicas en tres ocasiones
por cada paciente con la finalidad de determinar en cuales
oportunidades existía la posibilidad de visualizar al
flagelado. Estas observaciones se realizaron en primera instancia
el mismo día de la toma de la muestra, tomando una gota
del inóculo contenido en el medio de transporte con el asa
de platino previamente esterilizada y colocado en una
lámina portaobjeto. Las dos observaciones
microscópicas restantes se realizaron a las 72 horas de
haber incubado los medios selectivos en la estufa, tomando una
gota con el asa de platino previamente esterilizada, tanto del
caldo que se sembró en condiciones de aerobiosis como del
que se sembró en anaerobiosis, colocándola en cada
caso sobre la superficie de su respectiva lámina
portaobjeto.

En cada una de las ocasiones antes descritas, se
colocó sobre la gota de suspensión microbiana una
laminilla cubreobjeto, para realizar posteriormente la
observación al fresco, mediante el uso del microscopio de
luz (marca Leitz),
enfocando primero con un lente de poco aumento (10 x) y
después con lentes de mayor aumento (20 x y 40
x).

Resultados

Hallazgos Microbiológicos:

El crecimiento microbiano en el caldo selectivo (K.T.B.)
fue claramente evidenciado por la aparición de una
turbidez característica en el medio, así como la
aparición de un sedimento en el fondo del mismo. Asimismo,
se pudo observar un cambio de
color del medio
de azul a amarillo, debido al mismo crecimiento celular (FIGURA
1).

La observación al fresco de las láminas
preparadas permitió visualizar en los casos que se
consideraron como positivos, a los flagelados
desplazándose en algunos casos con movimientos circulares
y en otras ocasiones sin moverse y aislados. Usualmente, los
morfotipos flagelados de T. tenax pueden ser observados
con cuatro flagelos, pero en algunas ocasiones, pueden ser vistos
solamente con uno o dos flagelos (FIGURA 2).

FIGURA 1:
Crecimiento de T. tenax en medio de cultivo selectivo de
Kupferberg (K.T.B.).

FIGURA 2:
Observación de T. tenax a través del
microscopio de luz, donde se puede evidenciar la presencia de un
flagelo (Aumento 40 x).

Incidencia de T. tenax:

Los resultados de este estudio revelaron que T.
tenax fue encontrado en 9 pacientes (30%) del grupo
experimental (casos positivos), mientras que el protozoario no
pudo ser aislado en los 21 pacientes restantes (70%) de este
grupo (casos negativos) (FIGURA 3). En relación con el
grupo control, T. tenax se detectó solamente en 1
paciente (3%), siendo este el único caso positivo, en
tanto que en 29 pacientes de este grupo (97%), este
microorganismo no pudo ser identificado, considerándose
todos estos casos como negativos (FIGURA 4).

Cabe destacar además que
de los 9 pacientes del grupo experimental a quienes se les pudo
aislar T. tenax de sus cavidades bucales, en 7 de ellos se
pudo observar el flagelado al realizar la observación
microscópica inmediatamente después de la toma de
la muestra. En los casos de las observaciones
microscópicas realizadas a partir de las muestras
provenientes de los medios de cultivo 72 horas después de
su incubación, creció el protozoario en los 9
medios de cultivo correspondientes a los casos positivos al
sembrarlo en aerobiosis, en tanto que en las siembras en
condiciones de anaerobiosis, creció el protozoario en 5 de
los 9 casos positivos.

En cuanto al único caso positivo del grupo
control, se pudo identificar a T. tenax tanto en el
momento que se realizaron las observaciones microscópicas
inmediatamente después de la toma y recolección de
las muestras, como cuando se realizaron las observaciones al
microscopio de luz de las muestras provenientes de las siembras
por aerobiosis. No creció el flagelado al incubar los
medios en condiciones de anaerobiosis, ni en éste, ni en
ningún otro caso del grupo control.

La incidencia de este protozoario por sexo y por edad,
tanto en los grupos experimental como control, serán
expresadas a continuación (TABLAS 2, 3, 4 y 5):

TABLA 2:
Incidencia de T. tenax en pacientes con P.M.C. (Grupo
Experimental, por sexo).

TABLA 3:
Incidencia de T. tenax en pacientes sin P.M.C. (Grupo Control,
por sexo).

TABLA 4:
Incidencia de T. tenax en pacientes con P.M.C.(Grupo
Experimental, según edad).

TABLA 5:
Incidencia de T. tenax en pacientes sin P.M.C. (Grupo Control,
según edad).

Con respecto al sexo de los pacientes, es importante
destacar que la proporción de pacientes masculinos del
grupo experimental en los cuales se detectó T.
tenax fue mayor que en los pacientes femeninos, ya que este
protozoario fue identificado en 7 (23%) de los 17 pacientes
masculinos y en 2 (7%) de los 13 pacientes femeninos (TABLA 2),
mientras que el único caso positivo del grupo control
(3%), era una paciente del sexo femenino (TABLA 3).

En relación con la edad de los pacientes del
grupo experimental, la incidencia de T. tenax fue mayor en los
grupos etarios comprendidos entre 31 y 40 años y entre 41
y 50 años que en el grupo de pacientes mayores de 50
años, ya que en cada uno de los dos primeros grupos antes
señalados, el protozoario fue hallado en 4 (13,5%) de los
9 pacientes, mientras que en el último grupo
señalado, se encontró el otro caso positivo (3%)
(TABLA 4). La edad de la paciente del grupo control en la que se
encontró T. tenax era de 42 años (TABLA
5).

Discusión

Mientras que la gran mayoría de los estudios
sobre Microbiología bucal se refieren a diversos
aspectos de la bacteriología, la protozoología
bucal se ha dejado prácticamente al olvido, a pesar de la
alta prevalencia de infecciones en adultos donde se encuentra
T. tenax como agente
etiológico.24

Al respecto existen múltiples publicaciones donde
se reporta la complejidad de la microbiota residente en la placa
dental, no sólo en términos cuantitativos sino
cualitativos incluyendo además de bacterias, hongos,
micoplasmas y protozoarios, entre éstos T. tenax
como parte integrante de ese sistema
ecológico tan variado como lo es la cavidad
bucal.15,36

Por ello en el presente estudio se decidió
determinar la incidencia de este protozoario en un grupo de
pacientes con P.M.C., considerando que no existen reportes
previos en nuestro pais sobre este importante aspecto de la
patología periodontal.

Los resultados obtenidos en este trabajo
demostraron una mayor incidencia de T. tenax en el grupo
de pacientes que tenían P.M.C., en relación con la
baja incidencia de este protozoario en aquellos pacientes
pertenecientes al grupo control. Resultados similares al nuestro
han sido reportados en diversas
publicaciones.2,13,14,19,21,23,24,25,26,27,28,29,30,31

No obstante, en un estudio realizado en 200 pacientes
con P.M.C. no se aisló T. tenax en ninguno de los
mismos.37

Otra investigación reveló diferencias muy
claras desde el punto de vista microbiológico entre la
microbiota predominante en la placa dental subgingival de
individuos periodontalmente sanos y en aquellos que presentaban
Enfermedad Periodontal avanzada. Las observaciones fueron
realizadas mediante el empleo del
microscopio de contraste de fases.22

En los sujetos estudiados que presentaban Enfermedad
Periodontal avanzada se observó un alto porcentaje de
espiroquetas y de bacilos agrupados en organizaciones de
"cepillos de limpiar tubos", así como T. tenax, en
tanto que en los sujetos que no presentaban alteraciones
periodontales se evidenció un predominio de bacilos
filamentosos y cocos agrupados en asociaciones de "mazorca de
maíz".
No se evidenció en cambio la presencia de T. tenax
en ninguno de los sujetos de este
grupo.22

Lo anteriormente señalado ratifica la vigencia de
la Hipótesis Específica de la Placa
Dental, enunciada por Loesche,38 en la cual
postula la especificidad de los microorganismos predominantes en
la placa dental subgingival en relación directa con la
presencia o la ausencia de Enfermedad Periodontal.

El sexo no parece tener influencia en la
proporción en la cual se detectó T. tenax en
los pacientes del grupo experimental, aún cuando la
incidencia de este protozoario fue ligeramente mayor en los
pacientes del sexo masculino. Resultados similares se han
obtenido en cuanto al sexo, de acuerdo a lo expuesto en varias
publicaciones.14,21,23

La edad es un parámetro importante a la hora de
determinar la incidencia de T. tenax en pacientes con
P.M.C. Los resultados de este trabajo coinciden con lo afirmado
en varios reportes en el sentido de que cuando ésta
aumenta, la incidencia del flagelado en los grupos de pacientes
con la característica antes señalada es
mayor.14,15,19,21,28

Aún cuando se ha afirmado que T. tenax
está ausente en las cavidades bucales de niños y
adolescentes,14,15,19,21,28 esto
no es del todo cierto ya que se ha publicado un informe sobre la
incidencia de este protozoario en niños y adolescentes con
edades comprendidas entre 8 y 19 años, pudiéndose
aislar tanto en pacientes con alteraciones periodontales, como en
pacientes con la dentadura intacta y completamente
restaurada.39 Sin embargo, se ha podido
demostrar que T. tenax no se encuentra presente en la
cavidad bucal de niños muy
pequeños.40

La capacidad por parte de T. tenax de producir
infecciones en la cavidad bucal puede incrementarse en aquellos
pacientes que además de presentar cálculo dental,
sean respiradores bucales o presenten hipertrofia de las papilas
de la lengua (lengua
pilosa).21

Bózner y Demes41,42 publican
dos reportes en los cuales especifican que la actividad
proteolítica de T. tenax viene mediada por
proteasas de la cisteína o cisteinasas, las cuales no
solamente son responsables de la hidrólisis del
colágeno Tipo I, sino que pueden degradar otros tipos de
colágeno, específicamente los tipos III, IV y V,
todos presentes en los tejidos
periodontales. Asimismo se sugiere la posible presencia de
metaloproteinasas en T. tenax, las cuales pudieran
contribuir a la actividad antes mencionada.

Puntualizan además que esta actividad
enzimática lítica depende básicamente de la
temperatura en
la cual ocurra, siendo mayor a 35°C que a temperatura
ambiente,
así como el rango de pH en el cual
ocurra, incrementándose notablemente cuando este oscila
engtre 5 y 8 y en presencia de Ditiotreitol como activador
enzimático, así como en presencia de iones
sulfihidrilos.

También señalan que la inhibición
de la proteólisis puede ocurrir debido a la presencia de
varios inhibidores de la cisteinasa, tales como Iodocetamida,
N-Metilmaleimida y N-a
-Tosil-L-Lisina-Clorometil-Cetona (T.L.C.C.).

De los tipos de colágeno antes referidos, el Tipo
IV es digerido más efectivamente, en tanto que el Tipo I
es el más resistente a la acción
de las enzimas
sintetizadas por el
protozoario.41,42

Queda aún por aclarar si además de los
efectos respectivos que ejercen las cisteinasas producidas por
T. tenax sobre los tejidos periodontales, concretamente
sobre la matriz
proteica, cumplen otras funciones. De
allí que se sugiera su posible implicación en la
destrucción de varios componentes de diversa índole
del sistema inmunológico del
hospedero.41,42

Por otra parte, se ha podido demostrar in vitro
que la actividad proteolítica de células de
T. tenax detectadas en muestras de placa dental humana,
puede deberse a la presencia de
endopeptidasas.43 También se ha
demostrado que una cepa de esta especie (ATCC 30207) sintetiza
dos tipos distintos de hemolisinas, una de naturaleza
lipídica y la otra de naturaleza proteica, las cuales
destruyen los glóbulos rojos humanos y de algunos animales (ovejas,
conejos y caballos).44

Se ha comprobado, al menos de manera experimental que
T. tenax no se adhiere a las células epiteliales ni
a los fibroblastos porque no posee adhesinas o proteinas de
superficie que permitan la unión como tal, en tanto que
Trichomonas vaginalis si las posee, razón por la
cual se puede adherir a las células antes nombradas,
produciendo daño
celular.45

Recientemente, se han obtenido secuencias de los genes
de la enzima fumarasa clase II en
algunas especies de Trichomonas, a través de la
Reacción en Cadena de la Polimerasa (R.C.P.). Estos genes
fueron expresados en Tritrichomonas foetus y en
Tetratrichomonas gallinarum pero no en T. tenax ni
en Trichomonas hominis.46

Mediante el empleo de grandes concentraciones de
fluoruro de sodio, las cuales oscilan entre 1.700 y 10.000
p.p.m., se ha podido comprobar que los protozoarios de la cavidad
bucal humana no pueden sobrevivir. En cambio que con
concentraciones de fluoruro de sodio que oscilen entre 2 y 1.000
p.p.m. pueden vivir normalmente, reproducirse e inclusive mostrar
actividades comparables con las encontradas en los medios de
cultivo donde se desarrollan de ordinario.47
Sin embargo, se ha demostrado como dato curioso que la incidencia
de T. tenax en pacientes que consumían agua
fluorurada era mayor que en aquellos pacientes que no
consumían agua fluorurada, lo cual corrobora el hecho de
que la fluoruración de las aguas en concentraciones
pequeñas (1 p.p.m.) no tiene efectos tóxicos sobre
este microorganismo.21

La observación microscópica al fresco de
las muestras provenientes de cálculo dental y de placa
dental subgingival mediante el empleo del microscopio de luz
resulta imprescindible si se quiere lograr el hallazgo
rápido de T. tenax, pudiéndose visualizar
por lo general con uno o dos flagelos. No obstante, siempre se
deben inocular las muestras en los medios de cultivo más
adecuados y que permitan un hallazgo más seguro de esta
especie.8,48

Conclusiones

1.- La incidencia de T. tenax fue mayor en los
pacientes con P.M.C. que en los pacientes peridontalmente
sanos.

2.- La proporción en la cual se encontró
T. tenax en los pacientes con P.M.C. fue mayor en los del
sexo masculino que en los del sexo femenino.

3.- La incidencia de T. tenax en los pacientes
con P.M.C. fue mayor a medida que aumentaba la edad de los
mismos.

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Publicación original. Acta
odontol. venez, jun. 2002, vol.40, no.2, p.152-159. ISSN
0001-6365.
Reproducción autorizada por: Acta
Odontológica Venezolana,
fundacta[arroba]actaodontologica.com

Germán Pardi. Profesor
Asociado, Jefe del Departamento de Ciencias
Básicas II, Facultad de Odontología,
U.C.V.

Marianella Perrone –
Profesor Titular, Jefe del Laboratorio de
Microbiología del Instituto de Investigaciones
Odontológicas "Dr. Raúl Vincentelli" y Coordinadora
Adjunta de Investigación, Facultad de Odontología,
U.C.V.

Rosandra Mazzali de Ilja. Bioanalista Jubilada,
Cátedra de Microbiología, Facultad de
Odontología, U.C.V.